Способ иммобилизации гиалуронидазы для получения пероральной лекарственной формы

Гиалуронидаза – фермент, который способствует поддержанию оптимального баланса гиалуроновой кислоты в соединительной ткани и обеспечивает полноценную регенерацию тканей. В настоящее время лекарственные препараты гиалуронидазы используют в различных областях медицины. Между тем пероральных препаратов на ее основе на фармацевтическом рынке нет ввиду низкой биодоступности при данном способе введения. Одним из вариантов повышения биодоступности гиалуронидазы является электронно-лучевое пегилирование, которое предполагает получение лекарственных средств, у которых изменен фармакокинетический профиль в сторону увеличения энтеральной биодоступности, а также обладающих дополнительной защитой от действия протеолитических ферментов. Цель исследования – используя метод электронно-лучевого пегилирования, получить лабораторную партию препарата на основе высокоочищенной гиалуронидазы, которую в дальнейшем можно использовать при разработке перорального лекарственного препарата. Материал и методы. Использовали гиалуронидазу, которая была выделена из бычьей тестикулярной гиалуронидазы, и полиэтиленгликоли разной молекулярной массы. Проведены эксперименты с использованием импульсного линейного ускорителя ИЛУ-10 по электронно-лучевой иммобилизации фермента на водорастворимой полимерной матрице молекул полиэтиленгликолей. Образование конъюгатов гиалуронидазы и полиэтиленгликолей подтверждали методом эксклюзионной хроматографии. Результаты. В результате облучения ускоренными электронами гиалуронидазы и полиэтиленгликоля молекулярной массой 1500 Да образовывались конъюгаты фермента и полимерной матрицы. После электронно-лучевого пегилирования специфическая активность фермента сохранялась. Заключение. Получена лабораторная партия прототипа фармацевтической субстанции на основе иммобилизированной гиалуронидазы на полиэтиленгликоле.

1. Stern R. Devising a pathway for hyaluronan catabolism: are we there yet? Glycobiology. 2003;13(12):105–115. doi: 10.1093/glycob/cwg112

2. Забанова В.Е., Фурсова А.Ж., Мадонов П.Г. Фармакологические свойства гиалуронидазы и возможности ее клинического применения в офтальмологии. Сиб. науч. мед. ж. 2020;40(4):11– 19. doi: 10.15372/SSMJ20200402

3. Инструкция по медицинскому применению лекарственного препарата Лонгидаза. Регистрационное удостоверение ЛС-000764-220818. Режим доступа: https://www.vidal.ru/drugs/longidaze__31621

4. Дыгай А.М., Зюзьков Г.Н., Чурин А.А., Жданов В.В., Артамонов А.В., Бекарев А.А., Мадонов П.Г., Киншт Д.Н., Фомина А.Т., Ветошкина Т.В., … Рейхарт Д.В. Фармакологические свойства пегилированного с помощью нанотехнологии электронно-лучевого синтеза соматотропина. Бюл. эксперим. биол. и мед. 2012;153(2):232–234.

5. Дыгай А.М., Зюзьков Г.Н., Гурто Р.В., Жданов В.В., Удут Е.В., Мирошниченко Л.А., Симанина Е.В., Ставрова Л.А., Чайковский А.В., Маркова Т.С., … Бекарев А.А. Влияние пэгилированной эндо-β-N-ацетилгексозаминидазы на гуморальные механизмы регуляции функций прогениторных клеток при хроническом гепатите. Бюл. эксперим. биол. и мед. 2013;155(2):140–143.

6. Дыгай A.M., Зюзьков Т.Н., Жданов В.В., Мадонов П.Г., Артамонов А.В., Бекарев А.А., Удут В.В. Иммобилизированный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор. Фармакологические свойства и перспективы использования. Томск: Печатная мануфактура, 2011.149 с.

7. Киншт Д.Н., Кочнева Г.В., Мадонов П.Г., Ковалева Н.В. Специфическая противовирусная активность в отношении вируса гепатита C перорального лекарственного препарата на основе иммобилизированного интерферона λ-1. Рациональная фармакотерапия: сб. тр. конф., СанктПетербург, 6–8 октября 2016 г. СПб., 2016. С. 81–83.

8. Бекарев А.А., Артамонов А.В., Верещагин Е.И. Способ иммобилизации биологически активного вещества (БАВ) на носитель (варианты) и конъюгат БАВ-носитель, полученный данными способами. Пат. 2409669 РФ; опубл. 20.01.2011.

9. Топчиева И.Н. Применение полиэтиленгликолей в биохимии. Успехи химии. 1980;49(3):494– 517. doi: 10.1070/RC1980v049n03ABEH002458

10. Ибрагимов А.Н., Бикмуллин А.Г., Сатаева Д.А., Лопухов Л.В., Зайнуллин Л.И., Алимова Ф.К. Хроматографические методы очистки белков. Учебно-методическое пособие. Казань: ФГАОУ ВПО КФУ, 2013. 48 с.

11. Швецова А.М., Ершов К.И., Королев М.А., Мадонов П.Г. Результаты экспериментов по разработке высокоочищенной гиалуронатэндо-β-N-ацетилгексозаминидазы в качестве фармацевтической субстанции для лекарственного препарата. Бюл. мед. науки. 2023;(4):68–80. doi: 10.31684/25418475-2023-4-68