Сравнение различных видов прогрессивных гематоксилинов при окрашивании элементов системы кровообращения и гепатолиенальной системы

Цель исследования - сравнить различные типы прогрессивных гематоксилинов и оптимизировать протоколы окрашивания гематоксилином и эозином для кровеносных сосудов, миокарда, печени и селезенки.

Материал и методы. В качестве эталонных объектов исследования были выбраны сердце (желудочки), аорта (брюшной отдел), печень (правая доля) и селезенка (левая часть). После фиксации в 10%-м забуференном формалине производилась вырезка репрезентативных сегментов тканей с дальнейшим промыванием в проточной воде, обезвоживанием с использованием этанола возрастающей концентрации (70 %, 80 %, 95 %) и изопропанола, пропитыванием и заключением в парафин и серийной резкой (5 мкм) замороженных парафиновых блоков на микротоме. Далее проводилось окрашивание гематоксилинами Mayer, Gill или Carazzi в течение 2, 5 или 15 мин и 1%-м водно-спиртовым эозином в течение 2 мин (без использования дифференцирующего раствора), все остальные этапы протокола выполнялись стандартно. Результаты оценивались при помощи световой микроскопии тремя гистологами независимо друг от друга и в разное время.

Результаты. Все три типа прогрессивных гематоксилинов имели свои особенности окрашивания. Гематоксилин Mayer позволял достичь наиболее интенсивной окраски ядер клеток, однако при 15-минутном окрашивании он в ряде случаев придавал цитоплазме и внеклеточному матриксу фиолетово-синеватый оттенок, затрудняющий надлежащее контрастирование ядер. Гематоксилин Gill, напротив, прокрашивал ядра слабее остальных и позволял достичь четкого сине-фиолетового оттенка лишь после 15 мин окрашивания. В свою очередь, гематоксилин Carazzi позволял добиться сбалансированного контрастирования ядер и цитоплазмы/внеклеточного матрикса, не меняя розовато-красный оттенок эозина, однако окрашивал ядра слабее, чем гематоксилин Mayer. Окрашивания всеми видами гематоксилинов всех изученных типов тканей в течение 2 мин было недостаточным для интенсивной окраски и качественного контрастирования ядер клеток.

Заключение. Оптимальным способом окрашивания аорты гематоксилином в сочетании с 2-минутным окрашиванием эозином является использование гематоксилина Carazzi в течение 15 мин, для окрашивания печени рекомендуется применять гематоксилин Carazzi или Gill в течение 15 минут либо гематоксилин Mayer в течение 5 мин, окрашивание миокарда оптимально при использовании гематоксилина Carazzi или Gill в течение 15 мин, а для окрашивания селезенки следует использовать гематоксилин Carazzi в течение 5 мин.

1. Меркулов Г. А. Курс патологогистологической техники. 5-е изд., испр. и доп. Л.: Медицина, 1969. 423 с.

2. Коржевский Д.Э. Применение гематоксилина в гистологической технике. Морфология. 2007; 132 (6): 77-81.

3. Коржевский Д.Э., Гилерович Е.Г., Кирик О.В., Сухорукова Е.Г., Григорьев И.П. Морфологическая диагностика: подготовка материала для морфологического исследования и электронной микроскопии. СПб.: СпецЛит, 2013. С. 47-58.

4. Прокопьев Ю.А., Фоменко Д.В., Кизичен-ко Н.В., Кудрявцева Ю.А., Борисов В.В., Попова А.П., Михайлова Н.Н. Методические подходы к изучению антракосиликоза как фактора риска морфологических нарушений сосудов. Комплекс. пробл. серд.-сосуд. заболеваний. 2015; 4 (3): 23-27.

5. Avwioro G. Histochemical uses of haematoxylin. JPCS. 2011; 1 (5): 24-34.

6. Bancroft J.D., Layton C. The hematoxylins and eosin. In: Bancroft’s theory and practice of histological techniques, 8th ed. Eds. K. Suvarna, C. Layton, J. Bancroft. Elsevier, 2019: 126-139.

7. Chan J.K. The wonderful colors of the he-matoxylin-eosin stain in diagnostic surgical pathology. Int. J. Surg. Pathol. 2014; 22 (1): 12-32. doi: 10.1177/1066896913517939

8. Feldman A.T., Wolfe D. Tissue processing and hematoxylin and eosin staining. Methods Mol. Biol. 2014; 1180: 31-43. doi: 10.1007/978-1-4939-1050-2_3

9. Fischer A.H., Jacobson K.A., Rose J., Zeller R. Hematoxylin and eosin staining of tissue and cell sections. cSh Protoc. 2008; 2008: pdb.prot4986. doi: 10.1101/pdb.prot4986

10. Li Y., Li N., Yu X., Huang K., Zheng T., Cheng X., Zeng S., Li X. Hematoxylin and eosinstaining of intact tissues via delipidation and ultrasound. Sci. Rep. 2018; 8 (1): 12259. doi: 10.1038/s41598-018-30755-5

11. Martina J.D., Simmons C., Jukic D.M. High-definition hematoxylin and eosin staining in a transition to digital pathology. J. Pathol. Inform. 2011; 2: 45. doi: 10.4103/2153-3539.86284

12. Senturk G.E., Canillioglu Y.E. Which histochemical staining technique should I choose for biological specimens. In: Microscopy: advances in scientific research and education. Ed. A. Mendez-Vilas. Formatex Research Center, 2014: 769-775.

13. Titford M. The long history of hematoxylin. Biotech. Histochem. 2005; 80 (2): 73-78. doi: 10.1080/10520290500138372

14. Turkki R., Linder N., Kovanen P., Pellinen T., Lundin J. Identification of immune cell infiltration in hematoxylin-eosin stained breast cancer samples: texture-based classification of tissue morphologies. Proc. SPIE. 2016; 9791: 979110. doi: 10.1117/12.2217040

15. Zarella M.D., Yeoh C., Breen D.E., Garcia F.U. An alternative reference space for H&E color normalization. PLoS One. 2017; 12 (3): e0174489. doi: 10.1371/journal.pone.0174489