Preview

Сибирский научный медицинский журнал

Расширенный поиск

ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУР КЛЕТОК, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ЛИМБА ЧЕЛОВЕКА

https://doi.org/10.15372/SSMJ20190302

Полный текст:

Аннотация

В лимбе локализованы лимбальные эпителиальные стволовые клетки, которые обеспечивают регенерацию эпителия роговицы, как физиологическую, так и репаративную. Целью данной работы являлась характеристика клеточных культур, полученных из лимбального графта человека различными методами.

Материал и методы. Лимбальные стволовые клетки получали из области лимба энуклеированных глаз человека ферментативным методом и методом экспланта. Культивирование клеток осуществляли на амниотической мембране и без нее, в ростовых средах DMEM/F12 (Dullbecco’s Modified Eagle Medium/Nutrient F12 Ham) и CECBM (Corneal Epithelial Cell Basal Medium). Проведена морфологическая оценка и иммунофенотипирование клеточных культур.

Результаты и их обсуждение. При ферментативном методе выделения полученная культура клеток отличалась гетерогенностью, в суспензии неадгезированных клеток выявлено присутствие фибробластоподобных клеток, которые по внешнему виду и характеру роста напоминали стромальные. При иммунофенотипировании выявлено, что большинство клеток несут маркеры мультипотентных мезенхимальных стромальных клеток (CD90+/CD73+/CD105+/CD34–/CD45–) и меньшее количество – маркеры эпителиальных клеток (p63α+, ABCG2 +, CK19+). Культура, полученная методом экспланта, была более однородной. Клетки имели округлую эпителиоцитоподобную форму, хорошо адгезировались к поверхности амниотической мембраны и росли на ней. Результаты фенотипирования свидетельствуют, что они представлены главным образом эпителиальными клетками (p63α+, ABCG2 +, CK19+).

Заключение. При ферментативном методе выделения клеток из лимбального графта и культивировании их без фидера в ростовой среде DMEM/F12 культура представлена главным образом мультипотентными мезенхимальными стволовыми клетками. Выделение клеток лимба методом экспланта и культивирование их в селективной среде CECBM позволяют получить преимущественно культуру эпителиальных стволовых клеток.

Об авторах

М. А. Суровцева
НИИ клинической и экспериментальной лимфологии – филиал ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН
Россия

Суровцева Мария Александровна – кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник лаборатории клеточных технологий

630060, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2



И. А. Искаков
МНТК «Микрохирургия глаза» им. академика С.Н. Федорова Минздрава России, Новосибирский филиал
Россия

Искаков Игорь Алексеевич – доктор медицинских наук, заведующий операционным блоком

630096, г. Новосибирск, ул. Колхидская, 10



О. В. Повещенко
НИИ клинической и экспериментальной лимфологии – филиал ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН
Россия

Повещенко Ольга Владимировна – доктор медицинских наук, заведующая лабораторией клеточных технологий

630060, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2



А. П. Лыков
НИИ клинической и экспериментальной лимфологии – филиал ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН
Россия

Лыков Александр Петрович – кандидат медицинских наук, ведущий научный сотрудник лаборатории клеточных технологий

630060, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2



И. И. Ким
НИИ клинической и экспериментальной лимфологии – филиал ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН
Россия

Ким Ирина Иннокентьевна – кандидат медицинских наук, научный сотрудник лаборатории клеточных технологий

630060, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2



Е. В. Янкайте
НИИ клинической и экспериментальной лимфологии – филиал ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН
Россия

Янкайте Евгения Викторовна – младший научный сотрудник лаборатории клеточных технологий

630060, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2



В. И. Коненков
НИИ клинической и экспериментальной лимфологии – филиал ФИЦ Институт цитологии и генетики СО РАН
Россия

Коненков Владимир Иосифович – доктор медицинских наук, профессор, академик РАН, научный руководитель

630060, г. Новосибирск, ул. Тимакова, 2



В. В. Черных
МНТК «Микрохирургия глаза» им. академика С.Н. Федорова Минздрава России, Новосибирский филиал
Россия

Черных Валерий Вячеславович – доктор медицинских наук, профессор, директор

630096, г. Новосибирск, ул. Колхидская, 10



Список литературы

1. Branch M.J., Hashmani K., Dhillon P., Jones D.R., Dua H.S., Hopkinson A. Mesenchymal stem cells in the human corneal limbal stroma // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2012. 53. 5109–5116.

2. Chen Z., de Paiva C.S., Luo L., Kretzer F.L., Pflugfelder S.C., Li D.-Q. Characterization of putative stem cell phenotype in human limbal epithelia // Stem Cells. 2004. 22. (3). 355–366.

3. Dhamodaran K., Subramani M., Jeyabalan N., Ponnalagu M., Chevour P., Shetty R., Matalia H., Shetty R., Prince S.E., Das D. Characterization of ex vivo cultured limbal, conjunctival, and oral mucosal cells: A comparative study with implications in transplantation medicine // Mol. Vis. 2015. 21. 828–845.

4. Dominici M., Blanc K.L., Mueller I., SlaperCortenbach I., Marini F.C., Krause D.S., Deans R.J., Keating A., Prockop D.J., Horwitz E.M. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement // Cytotherapy. 2006. 8. (4). 315–317.

5. Dua H.S., Azuara-Blanco A. Limbal stem cells of the corneal epithelium // Surv. Ophthalmol. 2000. 44. 415–425.

6. Funderburgh J.L., Funderburgh M.L., Yiqin Du Y. Stem cells in the limbal stroma // Ocul. Surf. 2016. 14. (2). 113–120.

7. Ghoubay-Benallaoua D., de Sousa C., Martos R., Latour G., Schanne-Klein C., Dupin E., Borderie V. Easy xeno-free and feeder free method for isolation and growing limbal stromal and epithelial stem cells of the human cornea // Plоs One. 2017. 17. 1–18.

8. Gonzalez G., Sasamoto Y., Ksander B.R., Frank M.H., Frank N.Y. Limbal stem cells: identity, developmental origin, and therapeutic potential // Wiley Interdiscip. Rev. Dev. Biol. 2017. 7. (2). e303.

9. Haagdorens M., van Acker S.I., van Gerwen V., Ní Dhubhghaill S., Koppen C., Tassignon M.-J., Zakaria N. Limbal stem cell deficiency: Current treatment options and emerging therapies // Stem Cells Int. 2016. 2016. ID 9798374.

10. Hashmani K., Branch M.J., Sidney L.E., Dhillon P.S., Verma M., Mclntoch O.D., Horkinson A., Dua H.S. Characterization of corneal stromal stem cells with the potencial for epithelial transdifferentiation // Stem Cell Res. Ther. 2013. 4. (75). 1–13.

11. Li G.-G., Zhu Y.-T., Xie H.-T., Chen S.-Y., Tseng S.C.G. Mesenchymal stem cells derived from human limbal niche cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2012. 53. 5686–5697.

12. Luznik Z., Hawlina M., Malicev E., Bertolin M., Kopitar A.N., Ihan A., Ferrari S., Schollmayer P. Effect of cryopreserved amniotic membrane orientation on the expression of limbal mesenchymal and epithelial stem cell markers in prolonged limbal explant cultures // Plos One. 2016. 11. (10). 1–17.

13. Polisetty N., Fatima A., Madhira S.L., Sangwan V.S., Vemuganti G.K. Mesenchymal cells from limbal stroma of human eye // Mol. Vis. 2008. 14. 431–442.

14. Sacchetti M., Rama P., Bruscolini A., Lambiase A. Limbal stem cell transplantation: Clinical results, limits, and perspectives // Stem Cells Int. 2018. 2018. ID 8086269.

15. Xie H.-T., Chen S.-Y., Li G.-G., Tseng S.C.G. Isolation and expansion of human limbal stromal niche cells // Invest. Ophthalmol. Vis. Sci. 2012. 53. 279–286.


Для цитирования:


Суровцева М.А., Искаков И.А., Повещенко О.В., Лыков А.П., Ким И.И., Янкайте Е.В., Коненков В.И., Черных В.В. ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУР КЛЕТОК, ПОЛУЧЕННЫХ ИЗ ЛИМБА ЧЕЛОВЕКА. Сибирский научный медицинский журнал. 2019;39(3):15-20. https://doi.org/10.15372/SSMJ20190302

For citation:


Surovtseva M.A., Iskakov I.A., Poveshchenko O.V., Lykov A.P., Kim I.I., Yankayte E.V., Konenkov V.I., Chernykh V.V. CHARACTERISTICS OF CULTURES OF CELLS OBTAINED FROM HUMAN LIMB. Siberian Scientific Medical Journal. 2019;39(3):15-20. (In Russ.) https://doi.org/10.15372/SSMJ20190302

Просмотров: 10


Creative Commons License
Контент доступен под лицензией Creative Commons Attribution 4.0 License.


ISSN 2410-2512 (Print)
ISSN 2410-2520 (Online)