Лев Александрович Богданов
650002, Кемерово, Сосновый б-р, 6
Lev Aleksandrovich Bogdanov
650002, Kemerovo, Sosnovy blvd., 6
Дарья Кирилловна Шишкова
650002, Кемерово, Сосновый б-р, 6
Dariya Kirillovna Shishkova
650002, Kemerovo, Sosnovy blvd., 6
Антон Геннадьевич Кутихин - кандидат медицинских наук.
650002, Кемерово, Сосновый б-р, 6
Anton Gennadievich Kutikhin - candidate of medical sciences.
650002, Kemerovo, Sosnovy blvd., 6
Цель исследования - сравнить различные типы прогрессивных гематоксилинов и оптимизировать протоколы окрашивания гематоксилином и эозином для кровеносных сосудов, миокарда, печени и селезенки.
Материал и методы. В качестве эталонных объектов исследования были выбраны сердце (желудочки), аорта (брюшной отдел), печень (правая доля) и селезенка (левая часть). После фиксации в 10%-м забуференном формалине производилась вырезка репрезентативных сегментов тканей с дальнейшим промыванием в проточной воде, обезвоживанием с использованием этанола возрастающей концентрации (70 %, 80 %, 95 %) и изопропанола, пропитыванием и заключением в парафин и серийной резкой (5 мкм) замороженных парафиновых блоков на микротоме. Далее проводилось окрашивание гематоксилинами Mayer, Gill или Carazzi в течение 2, 5 или 15 мин и 1%-м водно-спиртовым эозином в течение 2 мин (без использования дифференцирующего раствора), все остальные этапы протокола выполнялись стандартно. Результаты оценивались при помощи световой микроскопии тремя гистологами независимо друг от друга и в разное время.
Результаты. Все три типа прогрессивных гематоксилинов имели свои особенности окрашивания. Гематоксилин Mayer позволял достичь наиболее интенсивной окраски ядер клеток, однако при 15-минутном окрашивании он в ряде случаев придавал цитоплазме и внеклеточному матриксу фиолетово-синеватый оттенок, затрудняющий надлежащее контрастирование ядер. Гематоксилин Gill, напротив, прокрашивал ядра слабее остальных и позволял достичь четкого сине-фиолетового оттенка лишь после 15 мин окрашивания. В свою очередь, гематоксилин Carazzi позволял добиться сбалансированного контрастирования ядер и цитоплазмы/внеклеточного матрикса, не меняя розовато-красный оттенок эозина, однако окрашивал ядра слабее, чем гематоксилин Mayer. Окрашивания всеми видами гематоксилинов всех изученных типов тканей в течение 2 мин было недостаточным для интенсивной окраски и качественного контрастирования ядер клеток.
Заключение. Оптимальным способом окрашивания аорты гематоксилином в сочетании с 2-минутным окрашиванием эозином является использование гематоксилина Carazzi в течение 15 мин, для окрашивания печени рекомендуется применять гематоксилин Carazzi или Gill в течение 15 минут либо гематоксилин Mayer в течение 5 мин, окрашивание миокарда оптимально при использовании гематоксилина Carazzi или Gill в течение 15 мин, а для окрашивания селезенки следует использовать гематоксилин Carazzi в течение 5 мин.
Aim of the study was to compare the distinct types of progressive hematoxylin stains and to optimize the protocols of hematoxylin and eosin staining of blood vessels, heart, liver and spleen.
Material and methods. Heart (ventricles), abdominal aorta, liver (right lobe) and spleen (left part) of the Wistar rats were excised, fixed in 10% neutral phosphate buffered formalin for 24 h, washed in tap water for 2 h, dehydrated in ascending ethanol series (70 % 80 %, and 95 %) and isopropanol, embedded into paraffin and then sectioned (5 pm) using rotary microtome. Staining was performed using Mayer’s, Gill’s, or Carazzi’s hematoxylin during 2, 5, or 15 minutes and 1 % alcoholic/aqueous eosin for 2 minutes without differentiative solution. Results were assessed by three independent histologists.
Results. All examined progressive hematoxylin stains had their distinctive features. Mayer’s hematoxylin demonstrated the most intensive nuclear staining; however, staining for 15 minutes could lead to the bluing of cytoplasm and extracellular matrix. In contrast, Gill’s hematoxylin was characterized by less intensive nuclear staining and achieved clear blue-violet shade only after 15 minutes of staining. Carazzi’s hematoxylin showed balanced coloration of nuclei and cytoplasm/ extracellular matrix and did not change the red/pink shades of eosin, yet the intensity of nuclear staining was less as compared to Mayer’s hematoxylin. Short-term (2 minutes) staining was insufficient to reach intensive nuclear staining.
Conclusion. The optimal hematoxylin and eosin staining protocol is to use eosin for 2 minutes following staining by Carazzi’s hematoxylin for 15 minutes (for aorta), Carazzi’s or Gill’s hematoxylin for 15 minutes or Mayer’s hematoxylin for 5 minutes (for liver), Carazzi’s or Gill’s hematoxylin for 15 minutes (for heart), and Carazzi’s hematoxylin for 5 minutes (for spleen).
The authors declare that there are no conflicts of interest present.