sibmedСибирский научный медицинский журналСибирский научный медицинский журнал2410-25122410-2520ИЦиГ СО РАН10.18699/SSMJ20250111sibmed-1959Research ArticleМЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКИЕ НАУКИBIOMEDICINEИммуногенность экспериментальных ДНК-вакцин, кодирующих гемагглютинин и стебель гемагглютинина вируса гриппа A (H5N8)Immunogenicity of experimental DNA vaccines encoding hemagglutinin and hemagglutinin stalk of influenza A (H5N8) virushttps://orcid.org/0009-0003-6524-3222ЛитвиноваВ. Р.LitvinovaV. R.

Виктория Руслановна Литвинова

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Victoria R. Litvinova

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

viktoriya_litvinova_1999@mail.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1684-9071РудомётоваН. Б.RudometovaN. B.

Надежда Борисовна Рудомётова, к. б. н.

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Nadezhda B. Rudometova, сandidate of biological sciences

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

andreeva_nb@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-7214-1855КисаковаЛ. А.KisakovaL. A.

Любовь Александровна Кисакова, 

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Lyubov A. Kisakova

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

orlova_la@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4889-6865КисаковД. Н.KisakovD. N.

Денис Николаевич Кисаков

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Denis N. Kisakov

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

def_2003@mail.ruhttps://orcid.org/0009-0009-4563-2099ЯковлевВ. А.YakovlevV. A.

Владимир Андреевич Яковлев, 

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Vladimir A. Yakovlev

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

yakovlev_va@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0009-0001-5203-2130ТигееваЕ. В.TigeevaE. V.

Елена Витальевна Тигеева

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Elena V. Tigeeva

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

tigeeva_ev@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-0768-1561БоргояковаМ. Б.BorgoyakovaM. B.

Мария Борисовна Боргоякова, к. б. н.

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Mariya B. Borgoyakova, сandidate of biological sciences

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

borgoyakova_mb@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0009-0002-3191-1360ИвановаК. И.IvanovaK. I.

Ксения Ивановна Иванова

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Ksenia I. Ivanova

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

ivanova_ki@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-1339-6732МарченкоВ. Ю.MarchenkoV. Yu.

Василий Юрьевич Марченко, д. б. н.

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Vasiliy Yu. Marchenko, doctor of biological sciences

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

marchenko_vyu@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0002-2354-7688ИльичеваТ. Н.IlyichevaT. N.

Татьяна Николаевна Ильичева, д. б. н.

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Tatyana N. Ilyicheva, doctor of biological sciences

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

ilicheva_tn@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-4365-8809КарпенкоЛ. И.KarpenkoL. I.

Лариса Ивановна Карпенко, д. б. н.

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Larisa I. Karpenko, doctor of biological sciences

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

karpenko@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0003-2808-4309РудомётовА. П.RudometovA. P.

Андрей Павлович Рудомётов, к. б. н.

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Andrey P. Rudometov, сandidate of biological sciences

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

rudometov_ap@vector.nsc.ruhttps://orcid.org/0000-0001-5356-0843ИльичёвА. А.IlyichevA. A.

Александр Алексеевич Ильичёв, д. б. н., проф.

630559; Новосибирская обл.; р. п. Кольцово

Alexandr A. Ilyichev, doctor of biological sciences, professor

630559; Novosibirsk Region; Koltsovo

ilyichev@vector.nsc.ruГосударственный научный центр вирусологии и биотехнологии «Вектор» РоспотребнадзораРоссияFederal Budgetary Research Institution State Research Center of Virology and Biotechnology “Vector” of RospotrebnadzorRussian Federation202527022025451100108Copyright © Литвинова В.Р., Рудомётова Н.Б., Кисакова Л.А., Кисаков Д.Н., Яковлев В.А., Тигеева Е.В., Боргоякова М.Б., Иванова К.И., Марченко В.Ю., Ильичева Т.Н., Карпенко Л.И., Рудомётов А.П., Ильичёв А.А., 20252025Литвинова В.Р., Рудомётова Н.Б., Кисакова Л.А., Кисаков Д.Н., Яковлев В.А., Тигеева Е.В., Боргоякова М.Б., Иванова К.И., Марченко В.Ю., Ильичева Т.Н., Карпенко Л.И., Рудомётов А.П., Ильичёв А.А.Litvinova V.R., Rudometova N.B., Kisakova L.A., Kisakov D.N., Yakovlev V.A., Tigeeva E.V., Borgoyakova M.B., Ivanova K.I., Marchenko V.Y., Ilyicheva T.N., Karpenko L.I., Rudometov A.P., Ilyichev A.A.Данная работа распространяется под лицензией Creative Commons Attribution 4.0.This work is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 License.https://sibmed.elpub.ru/jour/article/view/1959

   Вирус гриппа птиц A субтипа Н5 широко распространен в популяции птиц, и существует риск его передачи человеку, поэтому для предотвращения распространения вируса необходимо создание эффективной вакцины.

   Целью данного исследования являлась разработка прототипов ДНК-вакцин, кодирующих модифицированные варианты тримера гемагглютинина и стебля гемагглютинина высокопатогенного вируса гриппа птиц А (H5N8) и изучение их иммуногенных свойств.

   Материал и методы

   Материал и методы. Спроектированы, наработаны и очищены ДНК-конструкции, проведен анализ их экспрессии в эукариотических клетках с помощью ПЦР с обратной транскрипцией и вестерн-блот-анализа. Выполнена иммунизация лабораторных животных (сирийских хомяков)экспериментальными ДНК-вакцинами методом струйной инжекции, в сыворотке их крови с помощью ИФА определен титр антител. Сыворотки также исследованы в реакции вируснейтрализации в культуре клеток MDCK.

   Результаты и их обсуждение. Подтверждена экспрессия целевых генов в составе экспериментальных ДНК-вакцин на уровне транскрипции и трансляции. Анализ иммуногенности показал, что иммунизация сирийских хомяков конструкциями pVAX-H5 и pVAX-H5 delT4, кодирующими варианты эктодомена гемагглютинина с тримеризующим доменом фибритина бактериофага T4 и без него, с помощью струйной инжекции приводит к формированию специфических антител (средние титры 1:3×104 и 1:5×103 соответственно), обладающих вирус-нейтрализующей активностью (средний 50 %-й нейтрализующий титр 1:40). При этом в группе животных, иммунизированных ДНК-вакциной, кодирующей стебель гемагглютинина, специфические антитела не выявлены.

   Заключение

   Заключение. В ходе работы спроектированы и получены ДНК-вакцины, кодирующие варианты тримера гемагглютинина вируса гриппа подтипа A (H5N8) и его фрагмент (стебель). Проведено сравнение иммуногенности экспериментальных ДНК-вакцин и установлен наиболее перспективный вариант конструкции – pVAX-H5–, кодирующий модифицированный тример гемагглютинина вируса гриппа с тримеризующим доменом фибритина бактериофага T4.

   Avian influenza A virus subtype H5 is widespread in the bird population, and there is a risk of its transmission to humans, therefore, it is necessary to develop an effective vaccine to prevent virus spread.

   The aim of the work was to develop prototypes of DNA vaccines encoding modified variants of the hemagglutinin trimer of highly pathogenic avian influenza A virus (H5N8) and its fragment (stem) and to study their immunogenic properties.

   Material and methods

   Material and methods. DNA constructs were designed, produced and purified, their expression was analyzed in eukaryotic cells using reverse transcription PCR and Western blot analysis. Laboratory animals (Syrian hamsters) were immunized with experimental DNA vaccines using the jet injection method, the antibody titer in their sera was determined using ELISA. The sera were also tested in the virus neutralization reaction in MDCK cell culture.

   Results and discussion. Expression of target genes in experimental DNA vaccines was confirmed at the transcription and translation levels. Immunogenicity analysis showed that immunization of Syrian hamsters with pVAX-H5 and pVAX-H5 delT4 constructs encoding hemagglutinin ectodomain variants with and without the fibritin trimerizing domain of bacteriophage T4 using jet injection resulted in the formation of specific antibodies (average titer 1:3×104 and 1:5×103, respectively) with virus-neutralizing activity (average 50 % neutralizing titer 1:40). At the same time, specific antibodies were not detected in the group of animals immunized with the DNA vaccine encoding the hemagglutinin stalk.

   Conclusions

   Conclusions. In the course of the work, DNA vaccines encoding variants of the hemagglutinin trimer of the influenza virus subtype A (H5N8) and its fragment (stem) were designed and obtained. A comparison of the immunogenicity of experimental DNA vaccines was conducted and the most promising variant of the design – pVAX-H5, encoding a modified trimer of the hemagglutinin of the influenza virus with a trimerizing domain of the fibritin of the bacteriophage T4 – was established.

ДНК-вакцинывирус гриппа A (H5N8)струйная инжекцияиммуногенностьИФАвируснейтрализацияDNA vaccinesinfluenza A virus (H5N8)jet injectionimmunogenicityELISAvirus neutralizationРабота выполнена в рамках государственного задания ФБУН Государственного научного центра вирусологии и биотехнологии «Вектор» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человекаThe study was conducted under the state assignment of FBRI SRC VB “Vector” of RospotrebnadzorReferencesGao F., Liu X., Dang Y., Duan P., Xu W., Zhang X., Wang S., Luo J., Li X. AddaVax-adjuvanted H5N8 inactivated vaccine induces robust humoral immune response against different clades of H5 viruses. Vaccines (Basel). 2022;10(10):1683. doi: 10.3390/vaccines10101683Gao F., Liu X., Dang Y., Duan P., Xu W., Zhang X., Wang S., Luo J., Li X. AddaVax-adjuvanted H5N8 inactivated vaccine induces robust humoral immune response against different clades of H5 viruses. Vaccines (Basel). 2022;10(10):1683. doi: 10.3390/vaccines10101683WHO. Avian influenza weekly update number 977. Human infection with avian influenza A(H5) viruses. Available at: https://cdn.who.int/media/docs/default-source/wpro---documents/emergency/surveil-lance/avian-influenza/ai_20241213.pdfWHO. Avian influenza weekly update number 977. Human infection with avian influenza A(H5) viruses. Available at: https://cdn.who.int/media/docs/default-source/wpro---documents/emergency/surveil-lance/avian-influenza/ai_20241213.pdfWHO. Assessment of risk associated with recent influenza A(H5N1) clade 2.3.4.4b viruses 21 December 2022. Available at: https://cdn.who.int/media/docs/default-source/influenza/avian-and-other-zoonotic-in-fluenza/h5-risk-assessment-dec-2022.pdf?sfvrsn=a496333a_1&download=trueWHO. Assessment of risk associated with recent influenza A(H5N1) clade 2.3.4.4b viruses 21 December 2022. Available at: https://cdn.who.int/media/docs/default-source/influenza/avian-and-other-zoonotic-in-fluenza/h5-risk-assessment-dec-2022.pdf?sfvrsn=a496333a_1&download=trueEisfeld A.J., Biswas A., Guan L., Gu C., Maemura T., Trifkovic S., Wang T., Babujee L., Dahn R., Halfmann P.J., … Kawaoka Y.. Pathogenicity and transmissibility of bovine H5N1 influenza virus. Nature. 2024;633(8029):426–432. doi: 10.1038/s41586-024-07766-6Eisfeld A.J., Biswas A., Guan L., Gu C., Maemura T., Trifkovic S., Wang T., Babujee L., Dahn R., Halfmann P.J., … Kawaoka Y.. Pathogenicity and transmissibility of bovine H5N1 influenza virus. Nature. 2024;633(8029):426–432. doi: 10.1038/s41586-024-07766-6Жирнов О.П., Львов Д.К. Птичий грипп: «По ком звонит колокол?». Вопр. вирусол. 2024;69(2):101–118. doi: 10.36233/10.36233/0507-4088-213Zhirnov O.P., Lvov D.K. Avian flu: «For whom the bell tolls»? Voprosy virusologii = Problems of Virology. 2024;69(2):101–118. [In Russian]. doi: 10.36233/10.36233/0507-4088-213Xiong X., Xiao H., Martin S.R., Coombs P.J., Liu J., Collins P.J., Vachieri S.G., Walker P.A., Lin Y.P., McCauley J.W., Gamblin S.J., Skehel J.J. Enhanced human receptor binding by H5 haemagglutinins. Virology. 2014;456-457(100):179–187. doi: 10.1016/j.virol.2014.03.008Xiong X., Xiao H., Martin S.R., Coombs P.J., Liu J., Collins P.J., Vachieri S.G., Walker P.A., Lin Y.P., McCauley J.W., Gamblin S.J., Skehel J.J. Enhanced human receptor binding by H5 haemagglutinins. Virology. 2014;456-457(100):179–187. doi: 10.1016/j.virol.2014.03.008Kok A., Fouchier R.A.M., Richard M. Cross-reactivity conferred by homologous and heterologous prime-boost A/H5 influenza vaccination strategies in humans : a literature review. Vaccines. 2021;9(12):1465. doi: 10.3390/vaccines9121465Kok A., Fouchier R.A.M., Richard M. Cross-reactivity conferred by homologous and heterologous prime-boost A/H5 influenza vaccination strategies in humans : a literature review. Vaccines. 2021;9(12):1465. doi: 10.3390/vaccines9121465Furuyama W., Reynolds P., Haddock E., Meade-White K., Quynh Le M., Kawaoka Y., Feldmann H., Marzi A. A single dose of a vesicular stomatitis virus-based influenza vaccine confers rapid protection against H5 viruses from different clades. NPJ Vaccines. 2020;5(1):4. doi: 10.1038/s41541-019-0155-zFuruyama W., Reynolds P., Haddock E., Meade-White K., Quynh Le M., Kawaoka Y., Feldmann H., Marzi A. A single dose of a vesicular stomatitis virus-based influenza vaccine confers rapid protection against H5 viruses from different clades. NPJ Vaccines. 2020;5(1):4. doi: 10.1038/s41541-019-0155-zLitvinova V.R., Rudometov A.P., Karpenko L.I., Ilyichev A.A. mRNA vaccine platform: mRNA production and delivery. Russ. J. Bioorg. Chem. 2023;49(2): 220–235. doi: 10.1134/S1068162023020152Litvinova V.R., Rudometov A.P., Karpenko L.I., Ilyichev A.A. mRNA vaccine platform: mRNA production and delivery. Russ. J. Bioorg. Chem. 2023;49(2): 220–235. doi: 10.1134/S1068162023020152Ledesma-Feliciano C., Chapman R., Hooper J.W., Elma K., Zehrung D., Brennan M.B., Spiegel E.K. Improved DNA vaccine delivery with needle-free injection systems. Vaccines. 2023;11(2):280. doi: 10.3390/vaccines11020280Ledesma-Feliciano C., Chapman R., Hooper J.W., Elma K., Zehrung D., Brennan M.B., Spiegel E.K. Improved DNA vaccine delivery with needle-free injection systems. Vaccines. 2023;11(2):280. doi: 10.3390/vaccines11020280Bazhan S., Antonets D., Starostina E., Ilyicheva T., Kaplina O., Marchenko V., Durymanov A., Oreshkova S., Karpenko L. Immunogenicity and protective efficacy of influenza a dna vaccines encoding artificial antigens based on conservative hemagglutinin stem region and M2 protein in mice. Vaccines (Basel). 2020;8(3):448. doi: 10.3390/vaccines8030448Bazhan S., Antonets D., Starostina E., Ilyicheva T., Kaplina O., Marchenko V., Durymanov A., Oreshkova S., Karpenko L. Immunogenicity and protective efficacy of influenza a dna vaccines encoding artificial antigens based on conservative hemagglutinin stem region and M2 protein in mice. Vaccines (Basel). 2020;8(3):448. doi: 10.3390/vaccines8030448Fukuyama H., Shinnakasu R., Kurosaki T. Influenza vaccination strategies targeting the hemagglutinin stem region. Immunol. Rev. 2020;296(1):132–141. doi: 10.1111/imr.12887Fukuyama H., Shinnakasu R., Kurosaki T. Influenza vaccination strategies targeting the hemagglutinin stem region. Immunol. Rev. 2020;296(1):132–141. doi: 10.1111/imr.12887Cui X., Vervaeke P., Gao Y., Opsomer L., Sun Q., Snoeck J., Devriendt B., Zhong Z., Sanders N.N. Immunogenicity and biodistribution of lipid nanoparticle formulated self-amplifying mRNA vaccines against H5 avian influenza. NPJ Vaccines. 2024;9(1):138. doi: 10.1038/s41541-024-00932-xCui X., Vervaeke P., Gao Y., Opsomer L., Sun Q., Snoeck J., Devriendt B., Zhong Z., Sanders N.N. Immunogenicity and biodistribution of lipid nanoparticle formulated self-amplifying mRNA vaccines against H5 avian influenza. NPJ Vaccines. 2024;9(1):138. doi: 10.1038/s41541-024-00932-xBorgoyakova M.B., Karpenko L.I., Rudometov A.P., Volosnikova E.A., Merkuleva I.A., Starostina E.V., Zadorozhny A.M., Isaeva A.A., Nesmeyanova V.S., Shanshin D.V., … Ilyichev A.A. Self-assembled particles combining SARS-CoV-2 RBD protein and RBD DNA vaccine induce synergistic enhancement of the humoral response in mice. Int. J. Mol. Sci. 2022;23(4):2188. doi: 10.3390/ijms23042188Borgoyakova M.B., Karpenko L.I., Rudometov A.P., Volosnikova E.A., Merkuleva I.A., Starostina E.V., Zadorozhny A.M., Isaeva A.A., Nesmeyanova V.S., Shanshin D.V., … Ilyichev A.A. Self-assembled particles combining SARS-CoV-2 RBD protein and RBD DNA vaccine induce synergistic enhancement of the humoral response in mice. Int. J. Mol. Sci. 2022;23(4):2188. doi: 10.3390/ijms23042188Rudometova N.B., Fando A.A., Kisakova L.A., Kisakov D.N., Borgoyakova M.B., Litvinova V.R., Yakovlev V.A., Tigeeva E.V., Vahitov D.I., Sharabrin S.V., … Karpenko L.I. Immunogenic and protective properties of recombinant hemagglutinin of influenza A (H5N8) virus. Vaccines. 2024;12(2):143. doi: 10.3390/vaccines12020143Rudometova N.B., Fando A.A., Kisakova L.A., Kisakov D.N., Borgoyakova M.B., Litvinova V.R., Yakovlev V.A., Tigeeva E.V., Vahitov D.I., Sharabrin S.V., … Karpenko L.I. Immunogenic and protective properties of recombinant hemagglutinin of influenza A (H5N8) virus. Vaccines. 2024;12(2):143. doi: 10.3390/vaccines12020143Milder F.J., Jongeneelen M., Ritschel T., Bouchier P., Bisschop I.J.M., de Man M., Veldman D., Le L., Kaufmann B., Bakkers M.J.G., … Langedijk J.P.M. Universal stabilization of the influenza hemagglutinin by structure-based redesign of the pH switch regions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2022;119(6):e2115379119. doi: 10.1073/pnas.2115379119Milder F.J., Jongeneelen M., Ritschel T., Bouchier P., Bisschop I.J.M., de Man M., Veldman D., Le L., Kaufmann B., Bakkers M.J.G., … Langedijk J.P.M. Universal stabilization of the influenza hemagglutinin by structure-based redesign of the pH switch regions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2022;119(6):e2115379119. doi: 10.1073/pnas.2115379119Catani J.P.P., Job E.R., Ysenbaert T., Smet A., Ray S., LaRue L., Stegalkina S., Barro M., Vogel T.U., Saelens X. Pre-existing antibodies directed against a tetramerizing domain enhance the immune response against artificially stabilized soluble tetrameric influenza neuraminidase. NPJ Vaccines. 2022;7(1):11. doi: 10.1038/s41541-022-00435-7Catani J.P.P., Job E.R., Ysenbaert T., Smet A., Ray S., LaRue L., Stegalkina S., Barro M., Vogel T.U., Saelens X. Pre-existing antibodies directed against a tetramerizing domain enhance the immune response against artificially stabilized soluble tetrameric influenza neuraminidase. NPJ Vaccines. 2022;7(1):11. doi: 10.1038/s41541-022-00435-7Litvinova V.R., Rudometov A.P., Rudometova N.B., Kisakov D.N., Borgoyakova M.B., Kisakova L.A., Starostina E.V., Fando A.A., Yakovlev V.A., Tigeeva E.V., … Karpenko L.I. DNA vaccine encoding a modified hemagglutinin trimer of avian influenza a virus H5N8 protects mice from viral challenge. Vaccines (Basel). 2024;12(5):538. doi: 10.3390/vaccines12050538Litvinova V.R., Rudometov A.P., Rudometova N.B., Kisakov D.N., Borgoyakova M.B., Kisakova L.A., Starostina E.V., Fando A.A., Yakovlev V.A., Tigeeva E.V., … Karpenko L.I. DNA vaccine encoding a modified hemagglutinin trimer of avian influenza a virus H5N8 protects mice from viral challenge. Vaccines (Basel). 2024;12(5):538. doi: 10.3390/vaccines12050538Nguyen T.Q., Rollon R., Choi Y.K. Animal models for influenza research: strengths and weaknesses. Viruses. 202;13(6):1011. doi: 10.3390/v13061011Nguyen T.Q., Rollon R., Choi Y.K. Animal models for influenza research: strengths and weaknesses. Viruses. 202;13(6):1011. doi: 10.3390/v13061011Iwatsuki-Horimoto K., Nakajima N., Ichiko Y., Sakai-Tagawa Y., Noda T., Hasegawa H., Kawaoka Y. Syrian hamster as an animal model for the study of human influenza virus infection. J. Virol. 2018;92(4):e01693–17. doi: 10.1128/JVI.01693-17Iwatsuki-Horimoto K., Nakajima N., Ichiko Y., Sakai-Tagawa Y., Noda T., Hasegawa H., Kawaoka Y. Syrian hamster as an animal model for the study of human influenza virus infection. J. Virol. 2018;92(4):e01693–17. doi: 10.1128/JVI.01693-17Hoxie I., Vasilev K., Clark J.J., Bushfield K., Francis B., Loganathan M., Campbell J.D., Yu D., Guan L., Gu C. … Krammer F. A recombinant N2 neuraminidase-based CpG 1018® adjuvanted vaccine provides protection against challenge with heterologous influenza viruses in mice and hamsters. Vaccine. 2024;42(24):126269. doi: 10.1016/j.vaccine.2024.126269Hoxie I., Vasilev K., Clark J.J., Bushfield K., Francis B., Loganathan M., Campbell J.D., Yu D., Guan L., Gu C. … Krammer F. A recombinant N2 neuraminidase-based CpG 1018® adjuvanted vaccine provides protection against challenge with heterologous influenza viruses in mice and hamsters. Vaccine. 2024;42(24):126269. doi: 10.1016/j.vaccine.2024.126269de Jong N.M.C., Aartse A., van Gils M.J., Eggink D. Development of broadly reactive influenza vaccines by targeting the conserved regions of the hemagglutinin stem and head domains. Expert. Rev. Vaccines. 2020;19(6):563–577. doi: 10.1080/14760584.2020.1777861de Jong N.M.C., Aartse A., van Gils M.J., Eggink D. Development of broadly reactive influenza vaccines by targeting the conserved regions of the hemagglutinin stem and head domains. Expert. Rev. Vaccines. 2020;19(6):563–577. doi: 10.1080/14760584.2020.1777861

The authors declare that there are no conflicts of interest present.