Сазонова Елена Николаевна - д.м.н., проф.
680000, Хабаровск, ул. Муравьева-Амурского, 35; 680022, Хабаровск, ул. Воронежская, 49
Elena N. Sazonova - doctor of medical sciences, professor.
680000, Khabarovsk, Murav’yeva-Amurskogo st., 35; 680022, Khabarovsk, Voronezhskaya st., 49
Репа Ольга Геннадьевна.
681000, Комсомольск-на-Амуре, ул. Димитрова, 12
Olga G. Repa.
681000, Komsomolsk-na-Amure, Dimitrova st., 12
Малофей Юлия Борисовна - к.б.н.
680000, Хабаровск, ул. Муравьева-Амурского, 35
Yuliya B. Malofey - candidate of biological sciences.
680000, Khabarovsk, Murav’yeva-Amurskogo st., 35
Целью исследования явилась оценка вовлечения системы полиаминов в реализацию цитопротективного действия неопиатных аналогов лей-энкефалина в условиях окислительного стресса. Материал и методы. Пульмональные фибробласты крыс инкубировали с пептидом НАЛЭ (Phe–D-Ala–Gly–Phe–Leu–Arg, 0,1 мкМ) и его структурным аналогом пептидом G (Phe–D-Ala–Gly–Phe–Leu–Gly, 0,1 мкМ), некоторые серии – с дифторметилорнитином (ДФМО, 2 мМ). Окислительный стресс моделировали добавлением в культуральную среду Н2О2 (100 мкМ). На монослоях изучали морфометрические параметры нуклео-нуклеолярного аппарата фибробластов, пролиферативную активность клеток, особенности экспрессии p53. Результаты. Инкубирование фибробластов с Н2О2 приводит к стресс-реакции клеток, о чем свидетельствуют полное отсутствие митотической активности, достоверное уменьшение плотности клеточной культуры, увеличение площади ядер и повышение доли р53-позитивных фибробластов. Инкубирование с блокатором синтеза орнитиндекарбоксилазы ДФМО вызывало ухудшение состояния клеточной культуры: снижался митотический индекс, еще более значительно увеличивалось количество фибробластов, экспрессирующих р53. Предварительное инкубирование (до добавления Н2О2) с пептидами НАЛЭ и G уменьшало, но не исключало полностью негативное воздействие Н2О2 на клеточную культуру. Предварительное совместное инкубирование клеточных монослоев с пептидами и ДФМО показывало более выраженный цитопротективный эффект при окислительном стрессе. Так, в серии с НАЛЭ доля р53-позитивных фибробластов, плотность культуры, размер ядер фибробластов не имели отличий от контрольных параметров; регистрировалось достоверное увеличение суммарной площади ядрышек в ядрах клеток. В серии с пептидом G доля р53-позитивных фибробластов, размер их ядер, количество и суммарная площадь ядрышек были аналогичны контрольным показателям, выявлено достоверное возрастание плотности клеточной культуры по сравнению с контролем. Заключение. Результаты проведенного исследования указывают на прямое цитопротективное действие пептидов – неопиатных аналогов лей-энкефалина, в том числе в условиях блокады системы полиаминов.
The purpose of the study was to assess the involvement of the polyamine system in the implementation of the cytoprotective effect of non-opiate analogues of leu-enkephalin under conditions of oxidative stress. Material and methods. Rat pulmonary fibroblasts were incubated with the NALE peptide (Phe–D-Ala–Gly–Phe–Leu–Arg, 0.1 μM) and its structural analogue peptide G (Phe–D-Ala–Gly–Phe–Leu–Gly, 0. 1 µM), some series - with difluoromethylornithine (DFMO, 2 mM). Oxidative stress was modeled by adding H2O2 (100 μM) to the culture medium. The morphometric parameters of the nucleo-nucleolar apparatus of fibroblasts, the proliferative activity of cells, and the features of p53 expression were studied on monolayers. Results. Incubation of fibroblasts with hydrogen peroxide leads to a stress response of cells, as evidenced by the complete absence of mitotic activity, a significant decrease in cell culture density, an increase in the area of nuclei and an increase in the proportion of p53 + fibroblasts. Incubation with the ornithine decarboxylase synthesis blocker DFMO caused a deterioration in the condition of the cell culture: the mitotic index decreased, and the number of p53 + fibroblasts increased even more significantly. Pre-incubation (before adding H2O2) with NALE and G peptides reduced, but did not completely eliminate, the negative effect of hydrogen peroxide on cell culture. Preliminary co-incubation of cell monolayers with peptides and DFMO showed a more pronounced cytoprotective effect in OS. Thus, in the series with NALE, the indicators of the proportion of p53 + fibroblasts, culture density, and size of fibroblast nuclei did not differ from the control parameters; a significant increase in the total area of nucleoli in cell nuclei was recorded. In the series with peptide G, the indicators of the proportion of p53 + fibroblasts, the size of fibroblast nuclei, the number and total area of nucleoli were similar to the control indicators, and a significant increase in the cell culture density was revealed, compared to the control. Conclusions. The results of the study indicate a direct cytoprotective effect of peptides - non-opiate analogues of leu-enkephalin, including conditions of blockade of the polyamine system.
The authors declare that there are no conflicts of interest present.